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 ELISA常用方法對(duì)比

我們知道，ELISA可分為多種類(lèi)型測(cè)定，是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。 我公司技術(shù)部將各種ELISA常用方法的優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如下：

一、間接法：此測(cè)定方法與直接法類(lèi)似，差別在于一級(jí)抗體沒(méi)有酶標(biāo)記，改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。

優(yōu)勢(shì)：二抗可以加強(qiáng)信號(hào)，而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它zui多的免疫反應(yīng)性。

劣勢(shì)：交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。

二、雙抗體夾心法：被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體，此抗體可用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量；或不標(biāo)記，再透過(guò)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取，才可避免交互反應(yīng)或競(jìng)爭(zhēng)相同的抗原結(jié)合部位。

優(yōu)勢(shì)：高靈敏、高專(zhuān)一性，抗原無(wú)須事先純化。

劣勢(shì)：抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。

三、直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一級(jí)抗體，即可測(cè)定抗原總量，此一級(jí)抗體的特異性非常重要。

優(yōu)勢(shì)：操作手續(xù)簡(jiǎn)短，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。

劣勢(shì)：試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記，但不是每種抗體都適合做標(biāo)記，費(fèi)用相對(duì)提高。